Lees hier de samenvatting en de meest belangrijke oefenvragen van Advanced labtools

• 1 Les 1 flashcards Deel 1

  Dit is een preview. Er zijn 1 andere flashcards beschikbaar voor hoofdstuk 1
  Laat hier meer flashcards zien

• Wat valt onder biologisch start materiaal?

  • Dierlijk weefsel
    
  • Plant materials
  • Human biopsies or blood samples
  • cultures cells 
  • Etc.

• Wat is de algemene strategie voor eiwit zuivering en analyse?

  1. Biologisch start materiaal
     
  2. Pre-treatment: homogenisatie, lysis, fractionering 
  3. Protein purification: Salting out, kolom chromatografie, dialysis 
  4. Analyse: kwantificatie, activiteit bepaling 

• Wat voor analysen moeten bij elke stap uitgevoerd worden en waarom?

  • Totaal hoeveelheid eiwit (BCA)
    
  • SDS_PAGE / Western Blot
  • ELISA
  • (enzyme) activity assay

  
  
  Om bij te houden wat de zuiverheid/yield verhouding is in de loop van het proces, de stappen van het proces te controleren op fouten en om het proces te optimaliseren

• Wanneer kies je voor yield > zuiverheid en wanneer zuiverheid > yield?

  • Yield > zuiverheid: Start materiaal is erg duur, moeilijk te verkrijgen of gelimiteerd
    
  • Yield < zuiveerheid: Start materiaal is erg goedkoop, makkelijk te verkrijgen

• Wat is de belangrijkster factor die bepaald de zuiverheid van je eindproduct?

  • Waar het voor gebruikt gaat worden. Medisch gebruik of industrieel gebruik? Zuiverheid minimum verschilt  
    

• Wat zijn de technieken voor het prepareren van start materiaal?

  • Mechanisch methoden (goed koelen 4 graden celcius om denaturatie door warmte afgifte te minimaliseren)
  • Mixers en of blenders
  • Rotos-stators
  • Glass beads
  • Niet-mechanische methoden
  • Osmotic shock (hypertonic-hypotonic change)
  • Freeze-thaw cycles
  • Enzymatic breakdown of cell walls

• Wanneer gebruik je welke?Mixer/blenderRotor-statorSonication (bath)Sonication (probe)Potter-Elveihem tubeDounce homogenizer

  1. Grote weefsel sutkken, harsh method
     
  2. Kleine stukken weefsel zoals lever of long (harsh), organellen gaan stuk
  3. gentle
  4. harsh
  5. organellen intact, gentle
  6. organellen intact, gentle

• Wat zijn een aantal redenen voor loss of activity van een eiwit?

  • Denaturatie
    
  • verlies van cellulaire inhoud
  • pH veranderingen
  • inhibitie
  • verlies van co-factoren / co enzymen
  • verlies van post-translationele modificaties
  • oxidatie
  • degradatie / proteolysis
  • contaminatie (bacteria, fungi)

• Benoem Componenten van buffers ( en andere oplossingen) in eiwit isolatie (Heel belangrijk in de toekomst!)

  Benoem er minimaal 3 volledig (dus met voorbeelden)

• 1.1 Les 1 flashcards Deel 2

  Dit is een preview. Er zijn 9 andere flashcards beschikbaar voor hoofdstuk 1.1
  Laat hier meer flashcards zien

• Optimisation of procedures in lysis technieques, hoe doet men dat?

  • Combinaties van lysis technieken worden vaak gebruikt
    
  • Voor elke cel type, weefsel, eiwit is een optimale procedure. Richt je voor de hoogste yield van het intacte eiwit
  • Als cellen of weefsels te veel worden gehomogeniseerd komen er veel ongewilde producten in het lysate, dit maakt verdere processing erg lastig