Lees hier de samenvatting en de meest belangrijke oefenvragen van Microbiologie praktijk

• 1 Week 1: plasmide isolatie

  Dit is een preview. Er zijn 6 andere flashcards beschikbaar voor hoofdstuk 1
  Laat hier meer flashcards zien

• Wat zijn de 4 kenmerken van een plasmide

  • Kleine circulaire DNA moleculen buiten het chromosomale DNA. 
  • Kunnen zich onafhankelijk van elkaar delen.
    
  • Bevatten voordelige genen
  • Plasmide kunnen overgedragen worden naar andere bacteriën.

• Welke drie buffers voeg je toe in stap 2 van de DNA isolatie?

  Om de pellet volledig te laten resuspenderen en al het afval/dingen die niet nodig zijn te laten oplossen 
  

  1. A1 buffer (RNase te laten afbreken)
     
  2. A2 buffer
  3. A3 buffer

• Waar worden plasmide in de moleculaire biologie vaak voor gebruikt?

  Om een bacterie bepaald eigenschappen te geven

• Waar wordt de multiple cloning site voor gebruikt?

  Deze kunnen we gebruiken als je een extra gen in een plasmide wilt kloneren. Hierin zitten een hoop restrictie sites in.

• Waar wordt het LacZ gen in het plasmide voor gebruikt?

  • Hier zit het MCS in. 
  • Het is een onderdeel uit een Lac-operon' Deze codeert voor het eiwit beta galactosidase dat lactose afbreekt. 
  • Het kan gebruikt worden voor selectie. Wanneer je bacteriën die dit gen wel hebben blauwkleuren wanneer je bepaalde voedingstoffen heeft is het gen in takt. Als dit gen niet in takt is dan kleuren ze wit. 
    

• Waar wordt het Bla gen voor gebruikt.

  Ook dit gen in het plasmide kan gebruikt worden voor selectie: Deze codeert voor het eiwit beta-lactamase. Dit is een enzym die knipt bepaalde antibiotica. Dit is dus voor antibiotica resistentie. Als je bacteriën deze plasmide toedient worden de bacteriën resistent voor bacteriën.

• 1.1 Voorbereidingsvragen

  Dit is een preview. Er zijn 7 andere flashcards beschikbaar voor hoofdstuk 1.1
  Laat hier meer flashcards zien

• Met welke formule kan grofweg met de OD600 het kiemgetal bepaald worden?

  OD600 * 5 * 10ˆ8

• Waarom worden de bacteriestammen, welke voor de isolatie van plasmide DNA gebruikt worden, gegroeid in LB medium met ampicilline?

  Dit wordt gedaan om te voorkomen dat de bacteriën tijdens het delen hun plasmiden verliezen. Bij de deling van de bacterie cel moet het plasmide gekopieerd worden. Dit kost energie en is zonder antibioticum niet nodig. Als er dus geen antibioticum in het LB medium zit zal de bacterie het plasmide niet meer gaan mee vermenigvuldigen omdat het niet nodig is.

• Wat moet er aan buffer A1 worden toegevoegd tijdens de plasmide isolatie voor dat deze gebruikt kan worden?

  Hier met RNaseA aan worden toegevoegd. De kit die gebruikt wordt om plasmide te isoleren is gebaseerd om hele kleine nucleotide stukjes te isoleren. RNA is ook klein en blijft dus ook hangen op het filter. Daarom moet ook eerst het RNA worden verwijderd en dit gebeurd door het RNaseA. Dit is namelijk een enzym dat RNA afbreekt.

• Wat moet er aan de AQ buffer worden toegevoegd?

  Hier moet 96-100% ethanol aan worden toegevoegd.